pH電極的日常維護(hù)保養(yǎng)
時間：2022.06.30
發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值，對微生物生長具有非常明顯的影響，也是影響發(fā)酵過程中各種酶活的重要因素。因此，pH的監(jiān)測與調(diào)節(jié)，于發(fā)酵過程而言十分重要。
發(fā)酵過程中通常是采用復(fù)合pH電極直接插入罐內(nèi)發(fā)酵液的方式對pH進(jìn)行實時監(jiān)測。而高壓高溫的滅菌操作和發(fā)酵液的理化性質(zhì)會對pH電極測量造成影響，所以正確的使用方法和日常的維護(hù)保養(yǎng)尤其關(guān)鍵。
1、安裝使用前的準(zhǔn)備
1、安裝使用前的準(zhǔn)備
① 打開包裝時，要仔細(xì)檢查電極的pH敏感膜玻璃、隔膜（素?zé)沾尚荆┖筒Ａw是否存在機械損傷。
② 取下盛液套并用純水清洗電極頂部，然后用濕紙巾或者吸水紙輕輕擦干。注意不要摩擦pH敏感膜，以防增加響應(yīng)時間。
③ 將pH電極平緩移至垂直位置以防pH敏感膜玻璃球泡內(nèi)存有氣泡。如沒有充滿液體或存有氣泡，應(yīng)輕輕甩動電極使球泡內(nèi)充滿液體，直至沒有氣泡。
④ 電極使用前可先在酸性緩沖液（pH4.01）中浸泡數(shù)分鐘，用純水沖洗玻璃球泡部分，再用吸水紙輕輕將玻璃球泡部分的水吸干，再在中性緩沖液（pH6.86或7.00等）中浸泡數(shù)分鐘以活化電極，然后再開始校準(zhǔn)。
2、pH電極兩點校準(zhǔn)操作
將pH電極在標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中浸泡10min，待測定數(shù)值穩(wěn)定1min左右后，再依次進(jìn)行pH電極的第一點標(biāo)定和第二點標(biāo)定。
以HOLVES發(fā)酵罐為例：
② 連接電極，并用純水沖洗電極，沖洗后再用吸水紙輕輕吸干探頭上的水。
以HOLVES發(fā)酵罐為例：
① 進(jìn)行校準(zhǔn)前，根據(jù)緩沖液類型進(jìn)行參數(shù)選擇：[GB]指使用的是符合GB/T27501-2011標(biāo)準(zhǔn)的緩沖液，一般使用的幾種緩沖液pH值為4.00、6.86和9.18，其相對應(yīng)的“穩(wěn)定度”即“緩沖液的不確定度”通常選擇±0.02pH。霍爾斯通常使用的是METTLER TOLEDO InPro3030系列pH電極，參數(shù)[MT_9]即對應(yīng)其品牌的緩沖液，一般使用的緩沖液pH值為4.01、7.00和9.21，其“穩(wěn)定度”需根據(jù)所使用的緩沖液型號進(jìn)行選擇。
② 連接電極，并用純水沖洗電極，沖洗后再用吸水紙輕輕吸干探頭上的水。
③ 將玻璃球泡部分浸沒在第一種緩沖液（例pH=4.01）內(nèi)（隔膜應(yīng)完全浸沒在緩沖液中），待標(biāo)準(zhǔn)值穩(wěn)定后（30秒至60秒）點擊第一點確認(rèn)，第一點標(biāo)定結(jié)束。
④ 將電極從第一種緩沖液中取出，并用純水沖洗電極，沖洗后再用吸水紙輕輕吸干探頭上的水。
⑤ 將玻璃球泡部分浸沒在第二種緩沖液（例pH=9.18）內(nèi)（隔膜應(yīng)完全浸沒在緩沖液中），待標(biāo)準(zhǔn)值穩(wěn)定后（30秒至60秒）點擊第二點確認(rèn)，第二點標(biāo)定結(jié)束，等待使用（建議時間不要太長）。
3、電極校準(zhǔn)時的注意事項
① 校準(zhǔn)時請注意采用新鮮的緩沖液；
② 電極在緩沖液中放置1min后再進(jìn)行后續(xù)操作；
③ 沖洗電極后只能用柔軟的吸水紙吸干水分，切勿摩擦pH敏感膜；
④ 電極的校準(zhǔn)周期根據(jù)不同的使用環(huán)境和精度要求而定，請在保證精度的前提下確定適當(dāng)?shù)男?zhǔn)周期；
⑤ 由于pH電極探頭及其易碎，所以在使用過程中切勿磕碰。
4、pH電極性能測試
pH電極測定酸堿度法是依據(jù)能斯特（Nernst）方程原理來進(jìn)行的，電極的電動勢與pH值呈線性關(guān)系，一般用兩種不同pH值的緩沖液進(jìn)行標(biāo)定，用來確定曲線的斜率。而通常所說的pH電極響應(yīng)斜率，是指pH電極用來把電極的毫伏（mV）信號轉(zhuǎn)換為pH值，它是通過不同緩沖液測得的電壓差值，除以緩沖液差值得到的。這個斜率是判定電極壽命是否耗盡的一個重要指標(biāo)。
（Nernst能斯特方程）
（斜率與溫度呈正比關(guān)系）
HOLVES系列發(fā)酵罐可直接讀出電極所測液體的電壓信號，并且如果電極出現(xiàn)問題或者安裝、使用錯誤，pH校準(zhǔn)界面下方會彈出“電極不可用”紅色提示字樣，方便客戶了解電極的使用狀態(tài)。
（Nernst能斯特方程）
需要注意的是，由于斜率與溫度呈正比關(guān)系，當(dāng)溶液溫度發(fā)生變化，根據(jù)能斯特方程，溶液的ΔE將隨溫度T呈線性變化，而電極是根據(jù)檢測到的溶液電動勢能換算成pH值的，所以必須進(jìn)行溫度補償以抵消溫度對測量結(jié)果的影響。
（斜率與溫度呈正比關(guān)系）
所謂溫度補償，是將電極在標(biāo)定溫度下（一般為25℃）得到的斜率按能斯特公式換算到當(dāng)前溫度下的斜率，從而得到當(dāng)前溫度下正確的pH值。主要用來修正由于標(biāo)準(zhǔn)緩沖液等標(biāo)樣在標(biāo)定時的溫度與實際樣品溶液溫度不同引起的偏差。
HOLVES系列產(chǎn)品可以通過設(shè)備的溫度電極測量到當(dāng)前液體溫度，然后通過自身軟件計算后，顯示經(jīng)溫度補償后的pH值。所以，無論是校準(zhǔn)還是性能測試，都需要確保設(shè)備的溫度電極是工作狀態(tài)。
斜率測試具體操作方法：
① 把進(jìn)行兩點校準(zhǔn)后的電極用純水清洗，并用柔軟的吸水紙吸干水分。
② 按照上文校準(zhǔn)時使用的方法調(diào)整參數(shù)與穩(wěn)定度，下文以MT標(biāo)準(zhǔn)為例。
③ 首先使用pH=7.00的緩沖液測定零點，并在顯示屏上讀出mV值。HOLVES標(biāo)配的pH電極零點在6.5~7.5范圍內(nèi)，表示電極正常。
④ 將電極清洗后，再插入pH=4.01（記作pH1）的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中，在顯示屏上讀出mV值（記作mV1）
⑤ 將電極清洗后，再插入pH=9.21（記作pH2）的標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液中，在顯示屏上讀出mV值（記作mV2）
⑥ 計算電極的斜率，即（mV1-mV2）/（pH1-pH2）
⑦ 根據(jù)能斯特方程理想狀態(tài)下（25℃）時，理想斜率為59mV/pH，即溶液每變化一個pH值，電極就產(chǎn)生59mv的電位變化。那么理想校正下，斜率應(yīng)在59mV/pH左右。當(dāng)斜率的值小于53mV/pH或者大于63mV/pH時，需要更換新的pH電極，所以當(dāng)校正斜率在53~63mV/pH范圍時，結(jié)果是可信的。
HOLVES系列發(fā)酵罐可直接讀出電極所測液體的電壓信號，并且如果電極出現(xiàn)問題或者安裝、使用錯誤，pH校準(zhǔn)界面下方會彈出“電極不可用”紅色提示字樣，方便客戶了解電極的使用狀態(tài)。
5、電極的清洗
① 一般性污染用水、0.1mol/L NaOH或0.1mol/L HCl清洗電極數(shù)分鐘。
② 油脂或有機物污染用丙酮或乙醇清洗電極數(shù)秒鐘。
③ 硫化物污染（隔膜發(fā)黑）用硫脲/HCl處理，將玻璃球泡部分浸泡在溶液中（隔膜應(yīng)沒入溶液中），直到隔膜無色（至少1小時），然后浸泡在3mol/L的KCl中至少12小時，完全沖洗并重新校準(zhǔn)后可使用。
④ 蛋白質(zhì)污染（隔膜發(fā)黃）用胃液素/HCl處理，將玻璃球泡部分放入溶液中，確保隔膜浸沒在溶液中（至少1小時），然后用蒸餾水沖洗、重新校準(zhǔn)。
6、電極的保存
① 每個生產(chǎn)周期結(jié)束后，使用去離子水認(rèn)真沖洗電極頭與隔膜，絕不可使這些零件上的測量溶液變干。
② 電極不可放在蒸餾水中保存，較長時間不用時，應(yīng)當(dāng)將其連同電極頭與隔膜充分浸泡在3mol/L的KCI或9816/ViscolytTM電解液內(nèi)。
③ 電極不能長期干放，不能在表面附有干燥介質(zhì)時貯存電極。如果因錯誤導(dǎo)致電極被干燥存放數(shù)日，應(yīng)在使用之前將其浸泡在正常存儲電解液內(nèi)若干小時。
④ 應(yīng)時常檢查連接器是否出現(xiàn)受潮跡象。如有必要,用去離子水或酒精徹底清洗，然后小心擦干。
希望以上的內(nèi)容能對您的發(fā)酵提供一點幫助，如有問題可與我們聯(lián)系，HOLVES將竭誠為您服務(wù)！
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